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原核表達系統(tǒng)

      原核表達系統(tǒng)是通過原核生物來獲得外源蛋白的體系，也是最常用的蛋白表達體系之一，相比哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)，其成本更低，操作也更簡單。肽谷生物可以提供的原核表達系統(tǒng)服務(wù)包括：可溶性蛋白表達服務(wù)、內(nèi)毒素檢測服務(wù)等。

  • 可溶性蛋白表達服務(wù)

          肽谷生物可溶性蛋白表達采用大腸桿菌(E.coli)表達系統(tǒng)進行重組蛋白生產(chǎn)，您只需要提供目標蛋白序列或其對應(yīng)的基因序列，肽谷生物會按照合同約定的量及純度進行交付。

    服務(wù)流程與項目

    內(nèi)容

    周期

    1.基因合成

    密碼子優(yōu)化與基因合成

    1-2周

    2.載體構(gòu)建

    克隆至表達載體(質(zhì)粒)

    質(zhì)粒測序

             

    大量質(zhì)粒制備

    2-3周

    3.表達評估

    轉(zhuǎn)化適合菌株

    小量發(fā)酵培養(yǎng)

    SDS-PAGE檢測
    評估蛋白表達情況

    1-2周

    4.蛋白表達及純化

    根據(jù)表達評估進行發(fā)酵

    蛋白純化

    SDS-PAGE檢測，UV分析

    2-3周

    交付內(nèi)容：

    基因構(gòu)建測序報告；


    表達評估及可行性報告；


    純化蛋白；


    SDS-PAGE報告及實驗報告。


  • 內(nèi)毒素檢測

          肽谷生物提供內(nèi)毒素檢測服務(wù)。內(nèi)毒素(endoroxin)是革蘭氏陰性細菌(如大腸桿菌E.coli)細胞壁中的一種成分，叫做脂多糖(LPS)。大腸桿菌在重組蛋白表達過程中，會產(chǎn)生大量內(nèi)毒素。內(nèi)毒素是一種熱源，會導(dǎo)致生物體炎癥發(fā)熱反應(yīng)，所以使用重組蛋白于動物實驗時，內(nèi)毒素的檢測就很有必要。

    常用實驗對內(nèi)毒素的要求如下表：

    重組蛋白應(yīng)用實驗

    對內(nèi)毒素的要求

    體外酶活實驗

    無影響

    蛋白抗原、制備抗原

    無影響

    體外細胞分化培養(yǎng)

    要求低內(nèi)毒素<1EU/ug

    其他動物體內(nèi)實驗

    要求低內(nèi)毒素

    內(nèi)毒素檢測方法：

        內(nèi)毒素的檢測方法有半定量的凝膠法檢測和絕對定量的顯色法。目前國際上最精確的是基于鱟試劑的顯色法和凝膠法。

    內(nèi)毒素的一般水平與藥用標準：

    應(yīng)用領(lǐng)域

    內(nèi)毒素一般水平與標準

    大腸桿菌

    100萬 EU/ml

    自來水

    10-100 EU/ml

    生物制藥

    <0.01 EU/ml

    髓鞘內(nèi)注射藥

    0.2 EU/kg

    非髓鞘內(nèi)注射藥

    <5 EU/kg

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